电泳是分子生物学中最常用的工具之一。 用于分离核酸。 电穿孔是根据大小分离核酸的过程。
在电泳中，使用凝胶。 在装载核酸样品的凝胶中制作孔。
电流通过，核酸根据大小在凝胶中移动。 它有助于量化、分离和纯化核酸。
关键精华
- 琼脂糖凝胶分离较大的 DNA 和 RNA 分子，而聚丙烯酰胺凝胶更适合较小的分子和蛋白质。
- 琼脂糖是从海藻中提取的多糖，而聚丙烯酰胺是从丙烯酰胺单体中提取的合成聚合物。
- 琼脂糖凝胶的分辨率较低，但毒性较小且更易于处理。 相比之下，聚丙烯酰胺凝胶提供更高的分辨率，但由于其神经毒性性质可能更加危险。
琼脂糖与聚丙烯酰胺
琼脂糖和聚丙烯酰胺的区别在于琼脂糖分离大的 DNA 片段，而聚丙烯酰胺凝胶分离较短的蛋白质和核酸片段。 琼脂糖是水平倾倒的，而聚丙烯酰胺是垂直倾倒的。 琼脂糖可以加热和水平倾倒，但容易破碎，因此必须小心处理。
琼脂糖凝胶最常用于电泳 电泳. 由于它有助于根据大小分离核酸，因此可用于鉴定未知的 DNA 或 RNA 样本。
这里，使用已知大小的分子量标准，将未知核酸的条带与分子量标准进行比较，确定大小。
聚丙烯酰胺凝胶电泳称为 PAGE。 它通常用于根据蛋白质的大小分离蛋白质。
这种电泳的工作原理是，当提供电场时，带电的蛋白质或核酸样品会迁移通过凝胶。 由于生物分子的移动性根据其大小和电荷而变化。
使用的样品必须经过处理以达到均匀的电荷，以便流动性取决于尺寸。
对比表
| 比较参数 | 琼脂糖 | 聚丙烯酰胺 |
|---|---|---|
| 毒性 | 无毒 | 微毒 |
| 毛孔大小 | 毛孔粗大 | 毛孔变小 |
| 使用 | 琼脂糖凝胶主要用于分离DNA和RNA | 聚丙烯酰胺凝胶用于分离蛋白质并对其进行定量 |
| 注胶位置 | 水平位置 | 垂直位置 |
| 染料 | 溴乙锭 | 溴酚蓝 |
| 重用 | 琼脂糖可以熔化并重复使用 | 它通常不会被重复使用 |
什么是琼脂糖？
琼脂糖是一种用于制造凝胶的生物分子，凝胶是一种具有孔隙和通道的三维矩阵。 氢键将三维矩阵结合在一起。
由于存在氢键，加热很容易使基体结构变性。 样品生物分子穿过孔隙。
琼脂的熔化温度为85-95摄氏度，胶凝温度为35-42摄氏度。 琼脂糖凝胶是通过将琼脂糖与水混合并熔化制成的。
然后将其水平倒在装有梳子的模具上。 然后琼脂糖冷却并形成凝胶。 梳子留下一个孔，可以在其中加载样品。
低浓度的琼脂糖凝胶容易破裂。 所以，必须小心处理。 琼脂糖可用于分离 DNA 和 RNA。 琼脂糖凝胶中的孔要大得多，以便噬菌体进入。
琼脂糖是一种带有丙酮酸和硫酸基团的聚合物。 由于这些基团带负电荷，它会导致水流与 DNA 运动的方向相反。
染色 溴化乙锭用于对 DNA 染色，从而改变样品的大小和电荷。 将缓冲溶液倒入装置中，并通过电流，这会导致样品穿过琼脂糖凝胶并形成条带。
什么是聚丙烯酰胺？
聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺和丙烯酸组成的合成线性聚合物。 聚丙烯酰胺主动吸水并形成软凝胶。 它是电泳中使用的凝胶之一。
蛋白质和核酸可以根据其电泳迁移率在聚丙烯酰胺凝胶中进行定量。
丙烯酰胺水合制成的聚丙烯酰胺凝胶是好的，因为孔径可以根据水合来调节。 具有小孔径的凝胶可有效检测较小尺寸的分子。
较大的分子不能通过小孔被捕获，而较小的分子很容易穿过孔并形成条带。
聚丙烯酰胺凝胶以用于 SDS PAGE 实验而闻名。 SDS PAGE 展开为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 它用于根据大小分离蛋白质样品。
十二烷基硫酸钠是一种与蛋白质分子结合的洗涤剂。 与蛋白质结合后，这种去污剂破坏了蛋白质的二级和三级结构，使其变成线性的 多肽 链。
这种线性多肽带负电荷，在电场作用下会向阳极移动。 这里分子移动的距离与分子量的对数成反比。
它还用于检查低分子量的核酸样品。
琼脂糖和聚丙烯酰胺的主要区别
- 琼脂糖无毒，应用广泛，但聚丙烯酰胺被认为有轻微毒性，需谨慎处理
- 琼脂糖很复杂，由多种化学物质混合而成，而聚丙烯酰胺仅由一种分子组成。
- 琼脂糖凝胶的孔隙较大，而聚丙烯酰胺的孔隙相对较小。
- 琼脂糖多用于核酸电泳，聚丙烯酰胺多用于SDS PAGE。
- 琼脂糖凝胶是将融化的琼脂水平倾倒而成，而聚丙烯酰胺则是垂直倾倒而成。
- 未使用的琼脂糖可以熔化并重新倒入，但聚丙烯酰胺不能重复使用。
- 溴化乙锭是琼脂糖最常用的染料，而聚丙烯酰胺则主要使用溴酚蓝。
- https://analyticalsciencejournals.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/elps.200900052
- https://books.google.com/books?hl=en&lr=&id=gcqgDwAAQBAJ&oi=fnd&pg=PA3&dq=agarose+and+polyacrylamide&ots=Ogv5EA2634&sig=G6o6XdHg-xSybJlVa-0Csq_tC7g
最后更新时间：18 年 2023 月 XNUMX 日
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Piyush Yadav 在过去的 25 年里一直在当地社区担任物理学家。 他是一位物理学家，热衷于让我们的读者更容易理解科学。 他拥有自然科学学士学位和环境科学研究生文凭。 你可以在他的网站上阅读更多关于他的信息 生物页面.
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